Polaipeiptíde a dhíscaoileadh
Tá airíonna dúchasacha ceimiceacha ag gach aimínaigéad agus braitheann tuaslagthacht peptíde ar a sheicheamh agus ar a modhnuithe. Molaimid méid beag den pheptíde a ghlacadh le haghaidh tástála tuaslagthachta sula ndéantar na peptídí go léir a thuaslagadh.
Is céim an-tábhachtach é peptídí a dhíscaoileadh. D'fhéadfadh caillteanas peptide nó teip turgnamhach a bheith mar thoradh ar thuaslagadh míchuí. Braitheann tuaslagthacht na peptides go príomha ar sheicheamh an pheptíde, mar sin tabhair aird nuair a bhíonn an peptide á dhearadh. Moltar gur chóir go mbeadh iarmhair mhuirearaithe 20% sa seicheamh peptíde chun a intuaslagthacht a mhéadú.
Roimh úsáid, is féidir le custaiméirí na trí bhunphrionsabal seo a leanas a leanúint chun tuaslagóir oiriúnach a roghnú chun an peptide a dhíscaoileadh.
Gcéad dul síos, caithfidh an tuaslagóir roghnaithe a bheith in ann an peptide a dhíscaoileadh go hiomlán; Sa dara háit, caithfidh an tuaslagóir roghnaithe a bheith ag luí leis na coinníollacha turgnamhacha; Ar deireadh, níor cheart don tuaslagóir roghnaithe imoibriú leis an bpiptíd nó gan é a dhíghrádú.
Chomh fada agus a cheadaíonn an méid peptide, is féidir leat cuid bheag den peptide a dhíscaoileadh ar dtús agus ansin an sampla iomlán a dhíscaoileadh. Más gá duit an peptide a ghnóthú ó thuaslagóir, is féidir leat tuaslagóir tosaigh a roghnú a fhágann go bhfuil sé éasca é a bhaint tar éis lyophilization.
Féadfaidh na moltaí seo a leanas cabhrú leat peptídí a dhíscaoileadh:
Tá peptides le níos lú ná 5 aimínaigéid intuaslagtha go ginearálta i dtuaslagáin uiscí, agus go láidir aimínaigéid hidreafóbach (W, I, L, F, M, V, Y) ach amháin.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25%Aimínaigéid luchtaithe (E, D, K, R, H) de pheptídí hidreafaileacha agus ina bhfuil<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25% D’fhéadfadh go mbeadh aimínaigéid luchtaithe dothuaslagtha nó go páirteach intuaslagtha in uisce. Is fearr an peptide a thuaslagadh ar dtús i méid íosta de thuaslagóir orgánach láidir mar DMF, ACN, alcól Isopropil, eatánól, aigéad aicéiteach, 4-8 M GdnHCl, úiré, nó DMSO (nach bhfuil i seicheamh C, W, M), agus tuaslagóirí orgánacha eile dá samhail. Is fearr an tuaslagóir orgánach a thuaslagann an peptide a chur isteach go mall sa tuaslagán uiscí titim de réir a chéile. Má éiríonn an tuaslagán suarach, b'fhéidir go bhfuil an teorainn intuaslagthachta bainte amach aige agus nach bhfuil aon úsáid ann chun leanúint ar aghaidh lena thuaslagadh. Ba chóir a thabhairt faoi deara gur chóir go mbeadh an tuaslagóir a roghnaíodh ar dtús ag luí leis an gcóras turgnamhach.
Hydrophobic amino acid content >75% Go ginearálta tá peiptídí hidreafóbach láidir dothuaslagtha i dtuaslagáin uiscí. Ba cheart go gcaithfí peptídí den sórt sin ar dtús le tuaslagóirí orgánacha láidre (eg TFA, aigéad formach) agus d’fhéadfadh siad deascadh freisin má chuirtear le tuaslagán uiscí iad. D'fhéadfadh go mbeadh tiúchan ard tuaslagóirí orgánacha ag teastáil ón réiteach peptide deiridh chun é a dhínádúrú, agus go ginearálta ní úsáidtear tuaslagóirí orgánacha le haghaidh staidéir ar fheidhm bhitheolaíoch i gcealla beo.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) De ghnáth cruthaíonn seichimh pholaipeiptíde líonraí bannaí hidrigine idirmhóilíneacha iomarcacha agus foirmíonn siad glóthacha go héasca i dtuaslagáin uiscí tiubhaithe. Is féidir peptides den sórt sin a thuaslagadh mar a thuairiscítear i gcéim 3. Chun fadhbanna féideartha a laghdú le linn an díscaoilte, moltar do chustaiméirí aird níos mó a thabhairt ar dhearadh agus seicheamh chun tuaslagthacht an pheptíde a fheabhsú.